Цитология и гистология. Введение

1. Цитология и гистология. Введение

2. План лекции:

• Предмет, задачи и методы цитологии
• История создания и применения микроскопа
в биологии
• Типовые задачи клеточной биологии

3.

Цитология =
cytos (сосуд) + logos (наука)

4.

История создания и применения
микроскопа в биологии

5.

Изобретение телескопа и микроскопа – 1608 г.

6.

Создание микроскопа Галилео Галилеем – 1609 г.
Картина Д.Тинторетто, 1605-1607 гг.

7.

История микроскопа
Первооткрыватель клетки Роберт Гук (1635-1703)
Rita Greer, 2011

8.

9.

Анатомия растений
Неемия Грю (1641-1712)

10.

История микроскопа
Johannes Vercolje, 1680
Основоположник
биологической микроскопии
Антон ван Лёвенгук (16321723) и его микроскопиум

11.

Старинные микроскопы
1680 г.
Около 1760 г.
1850 г.

12. Клеточная теория – 1839 г.

Теодор Шванн (1810 – 1882)
• Как растения, так и животные состоят
из сходных элементов – клеток, что
свидетельствует о единстве всей
живой природы.
• Сходство клеток растений и животных
вытекает из общего для них способа
образования
• Известное в ботанике представление о
клетке как автономной элементарной
единице растительного организма надо
распространить и на животных.
• Организм
представляет
собой
совокупность образующих его клеток
и поэтому «основа питания и роста
лежит не в организме как целом, а в
отдельных элементарных его частях –
клетках».

13.

Развитие клеточной теории - 1859 и 1862 гг.
Рудольф Вирхов (1821-1902)
Эрнст Брюкке (1819-1892)

14. Исследования оплодотворения, митоза и мейоза (1875-1890 гг.)

Эдуард Страсбургер
(1844-1912)
Оскар Гертвиг
Вальтер Флемминг
(1849-1922)
(1843-1905)

15.

Клеточная биология – 1884 г.
Жан Батист Карнуа
(1836-1899)
• исследование общей
структурно-функциональной
организации клетки;
• изучение специализации
клеток в зависимости от
выполняемых ими функций
(т.е. особенностей клеток
различных тканей)
• сравнительный анализ
клеток (т.е. особенностей
клеток одной ткани у
различных организмов).

16.

Дифракционная теория микроскопа
Эрнст Карл Аббе (1840-1905)
Предел Аббе = 250 нм

17.

Создание электронного микроскопа
М.Кноль и Э.Руска (1932)

18. Конфокальный микроскоп LSM5 Pascal

19. Результаты применения микроскопии в биологии

20.

Типовые задачи
клеточной биологии

21.

Подсчет числа живых клеток
Прижизненная микроскопия клеток Catharanthus roseus

22.

Флуоресцентная микроскопия
Один или два флуорохрома
Распределение препарата Фотолон в клетках HeLa: А –
возбуждение зеленым светом, В - окраска АО при
возбуждении синим светом, С - совместная обработка
Фотолоном+АО, возбуждение ультрафиолетом

23.

Флуоресцентная микроскопия
Два флуорохрома одновременно,
конкурентный и неконкурентный варианты
Окраска митохондрий родамином
123 и клеточных ядер бромидом
этидия. Культура клеток HEK-293
Индикация
некроза
и
апоптоза. Культура клеток
К562

24.

Флуоресцентная микроскопия
Три флуорохрома последовательно
Иммуноцитохимия репарации двойных разрывов ДНК в клетках TK6. ДНК
окрашена DAPI в синий цвет, антитела к γ-H2AX мечены TRITC и
флуоресцируют красным, антитела к Rad 51 мечены FITC и флуоресцируют
зеленым. Справа – компьютерная обработка для определения колокализации
факторов

25.

Метод комет
А – интактные клеточные ядра, В – фрагментация ДНК под
декйствием γ-лучей в дозе 5 Гр, С – фрагментация ДНК при апоптозе.
Визуализация ДНК бромидом этидия.

26.

Метод FISH
Схема локализации
специфических ДНК проб
AML/ETO t(8;21)(q21;q22)
(KreatechDiagnostics)
Использованы
локус-специфические
ДНК-пробы.
Метились
гены
RunX1(AML1)
и
RunX1T1(ETO,
MTG8), а так же границы ядра клетки.
Съёмка проводилась по трём каналам:
синий (DAPI) – границы ядра, зелёный
(Oregon Green 488) - RunX1(AML1) и
красный (Alexa Fluor) - RunX1T1(ETO,
MTG8).

27. Проточная цитометрия - принцип

28. Проточная цитометрия - прибор

29. Распределение клеток по митотическому циклу

30.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!