Возбудители аэрогенных инфекций. Дифтерия, коклюш, туберкулез

1. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Ульяновский государственный университет»

Возбудители аэрогенных инфекций:
дифтерии, коклюша, туберкулеза
Лектор:
доктор медицинских наук, профессор
Н.И.Потатуркина-Нестерова

2. План лекции

1.
Таксономия и биологические свойства дифтерийных бактерий.
2.
Эпидемиология и патогенез дифтерии.
3.
Микробиологическая диагностика, лечение и специфическая
профилактика дифтерии.
4.
Таксономия и биологические свойства возбудителя коклюша.
5.
Эпидемиология и патогенез коклюша.
6.
Микробиологическая диагностика, лечение и специфическая
профилактика коклюша.
7.
Таксономия и биологические свойства возбудителей
туберкулеза.
8.
Эпидемиология и патогенез туберкулеза.
9.
Микробиологическая диагностика, лечение и специфическая
профилактика туберкулеза.

3. Возбудитель дифтерии Открыт в 1883-1884 гг. Клебсом и Леффлером

Род Corynebacterium
Вид C. diphtheriae
Биовары:
gravis
mitis
intermedius

4. Препарат (окр. по Граму)

5. Биологические свойства

Морфология. Тонкие изогнутые палочки с
закругленными концами, напоминают булаву. Спор, капсул
нет. Есть фимбрии, микрокапсула
Имеются волютиновые зерна. Располагаются в виде
«растопыренных пальцев» или буквы V.
Тинкториальные свойства. Гр+, валютиновые
зерна – окр. по Нейссеру
Требовательны к питательным средам: сывороточные
среды (ср. Леффлера, Ру) – желтовато-кремовые колонии в
виде шагреневой кожи;
Селективные дифференциально-диагностические среды кровяные теллуритовые среды (КТА, Клауберг II). На
теллуритовых средах различают колонии биоваров gravis,
mitis и intermedius

6. Биовар gravis – серые колонии в виде цветков маргаритки, биовар mitis – мелкие черные гладкие колонии

7.

8. Биохимические свойства

Факультативные анаэробы
Гидролизуют Г , не расщепляют С
Отрицательная проба Закса
Положительная проба Пизу:
расщепляют цистин до сероводорода, который
взаимодействуя с уксуснокислым свинцом, вызывает
почернение столбика сывороточного агара в
результате образования сернистого свинца.

9.

10. Отрицательная проба Закса

Уреазу не продуцируют,
поэтому цвет бульона
с мочевиной и
феноловым красным
не изменяется

11. Антигены

О-а/г, термостабилен
По К-а/г выделяют 40 сероваров mitis, 14 сероваров
gravis, 4 серовара intеrmedius.
Факторы патогенности
Поверхностные структуры, отвечающие за адгезию
Экзотоксин - термолабильный, высокотоксичный,
поражает сердечную мышцу, надпочечники и
периферическую нервную систему. Состоит из двух
фракций: фракция А - токсическая функция, фракция В
- прикрепление токсина к чувствительным клеткам
Ферменты агрессии: нейраминидаза,
гиалуронидаза, гемолизин, дермонекротоксин.

12. Эпидемиология

Антропонозное заболевание
Источник: больные и носители токсигенных штаммов
Механизм передачи возбудителя – аэрозольный (при
разговоре, чихании, кашле)
Путь передачи – воздушно-капельный, возможен
контактно-бытовой путь: через посуду, полотенце,
игрушки и т. д. Вероятно также заражение через
инфицированные молочные продукты.
Возбудитель дифтерии устойчив во внешней среде, в
высушенном состоянии он сохраняется до 1 месяца.
Инкубационный период – 2-10 дней.
Токсинемическое заболевание.

13. Патогенез

Входные ворота инфекции: слизистые оболочки
носоглотки, реже – глаз, половых органов (у женщин),
кожных покровов, ран. Поэтому чаще встречается
дифтерия зева, реже формы с экстрафарингеальной
локализацией
Возбудитель локализуется на месте внедрения и
инициирует фибринозное воспаление. Возможно
блокирование воздухоносных путей и развитие
асфиксии. Процесс сопровождается регионарными
лимфоаденитами
Продуцирование экзотоксина, который и
обусловливает системные проявления – поражение
нервной системы, сердца, сосудов, почек, надпочечников

14. Клинические проявления

В зависимости от локализации поражения различают
следующие формы: дифтерию ротоглотки, реже - носа,
половых органов, глаз, кожи и др.
Начало заболевания – острое, высокая температура,
симптомы умеренной интоксикации (головная боль,
общая слабость, потеря аппетита, побледнение кожных
покровов, повышение частоты пульса), боль в горле
На миндалинах образуется фибринозный налет, который
снимаются тяжело, оставляя после снятия участки
кровоточащей слизистой
Наиболее часто и опасно дифтерия осложняется
инфекционно-токсическим шоком, токсическим
нефрозом, недостаточностью надпочечников,
миокардитом

15. Дифтерия зева

16. Методы диагностики

Бактериологический – материал со слизистых оболочек носа и
ротоглотки, глаз, гениталий, кожи и др. Бакпосев на питательные
среды необходимо осуществить не позднее 2-4 часов после
забора материала
Определение токсигенности выделенного штамма реакцией
преципитации в геле
Серологический – определение нарастания титра
антитоксических антител, имеет вспомогательное значение
(РПГА, РНГА, ИФА)
ПЦР для обнаружения гена токсигенности tox+ в ДНК
выделенной культуры C. diphtheriae

17. Диагностика

Исследуемый
материал
Среда
обогащения
бактериоскопия
КТА
бактериоскопия
чувствительность
к антибиотикам
Биохим. св-ва
Сывороточная
среда
Проба на
токсигенность
фаготипирование
РА
Проба Пизу

18.

19. Проба Шика

Применяют для выявления противодифтерийного антитоксического
иммунитета.
Для постановки в/к в области предплечья вводят 0,2 мл стандартного
дифтерийного токсина, содержащего 1/64 ДЛМ для морской свинки.
Результат учитывают через 72 - 96 ч.
При отсутствии а/т к токсину на месте введения образуются краснота
и инфильтрат (положительная реакция); при наличии антитоксических
а/т инфильтрат не образуется или он меньше 1 см (отрицательная
реакция).
Результаты пробы Шика используют
для оценки коллективного иммунитета
и проведения профилактических прививок.
В настоящее время с этой целью также
применяют РПГА с эритроцитарным
диагностикумом.

20. Специфическая профилактика и лечение

Противодифтерийная лошадиная сыворотка (антитоксин)
Антибиотикотерапия: β-лактамы, тетрациклины, хинолоны
При необходимости: детоксикация, кардиотропные препараты,
интубация
Профилактика: АКДС, АДС, АДС-М. Курс вакцинации состоит из 3х прививок с интервалом 1,5 месяца (3 мес, 4,5 мес и 6 мес).
Ревакцинация в 18 месяцев, 7 и 14 лет. Каждые последующие 10 лет
проводят АДС-М анатоксином.
Проба Безредка
0,1 мл р-ра сыворотки в разведении
1:100 вводят в/к.
При отрицательной реакции 0,1 мл
вводят п/к в плечо.
Через 45-60 мин. вводят всю дозу,
нагретую до 36оС.

21. Возбудители коклюша и паракоклюша

Открыты в 1906 г. Ж. Борде и О.Жангу
Род: Bordetellа
Виды: В.pertussis, B. parapertussis
Коклюш и паракоклюш – это острые антропонозные
воздушно-капельные бактериальные инфекции,
характеризующиеся поражением верхних дыхательных
путей и приступами спастического кашля.

22. Биологические свойства

Мелкие кокковидные грамотрицательные палочки с
закругленными концами.
Неподвижны. Спор не образуют.
Имеют микрокапсулу и пили.

23. Bordetella pertussis

24. Культуральные свойства

Строгие аэробы. Требовательны к условиям культивирования
Среды: Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар +
кровь+пенициллин), казеиново-угольный агар (КУА).
Мелкие выпуклые колонии в виде капелек ртути или
жемчужинок в течение 3-5 сут. В жидких средах помутнение и
осадок.
Биохимическая активность низкая.
Не расщепляют белки и углеводы, не восстанавливают нитраты
Образуют каталазу
Антигены
Соматический термостабильный О- антиген, термолабильные
капсульные К-антигены

25. Рост бордетелл на средах: а) казеиново-угольный агар (КУА); б) Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар с кровью)

26. Факторы вирулентности

Факторы адгезии к мерцательномуэпителию верхних дыхательных
путей (бронхов, трахеи): 1) филаментозный гемаггпютинин; 2)
фимбрии, капсульные агглютиногены, 3) белок пертактин.
Пертуссис-токсин: субъединица В способствует прикреплению,
субъединица А – к накоплению цАМФ. Повышает проницаемость
сосудов, стимулирует миграцию лимфоцитов, подавляет фагоцитоз и
др.
Дерматонекротоксин – вызывает местную воспалительную
реакцию эпителия.
Трахеальный цитотоксин – повреждает эпителиоциты
респираторного тракта
Эндотоксин (липополисахарид) – термоста-бильный.
Способствует повреждению эпителия.
Аденилатциклаза – подавляет фагоцитоз
Гиалуронидаза, плазмокоагулаза

27. Эпидемиология

Резервуаром и источником коклюшной инфекции является
больной человек.
Контагиозный период включает последние дни инкубации
и 5-6 дней после начала заболевания. Пик заразности
приходится на момент максимально выраженной клиники.
Механизм передачи - аэрозольный
Путь передачи возбудителя - воздушно-капельный.
Тропизмом к реснитчатому эпителию респираторного
тракта
Входные ворота - слизистые оболочки гортани, трахеи,
бронхов. Бордетеллы не проникают внутрь клетки
(неинвазивные микробы) и не поступают в кровь.

28. Патогенез

1 стадия. Адгезия при помощи всех имеющихся
факторов прикрепления.
2 стадия. Местное повреждение под действием
токсинов. Может развиться некроз участков эпителия,
перибронхиальное воспаление и интерстициальная
пневмония.
3 стадия. Стадия системных повреждений.
Возбуждение рецепторного аппарата верхних
дыхательных путей. Возбуждение передается в область
кашлевого центра, где формируется стационарный очаг
возбуждения. Спастический кашель

29. Клинические проявления

Инкубационный период – около 2 недель.
Катаральный период – легкий кашель, чихание,
незначительное повышение температуры.
Параксизмальный период – приступообразный
спастический кашель, гипоксия. Судорожный синдром,
рвота.
После перенесенного заболевания прочный иммунитет.

30. Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – слизистое
отделяемое с задней стенки глотки, берут стерильным
тампоном или методом «кашлевых пластинок».
Методы диагностики
Бактериологический.
Серологический (РСК, РПГА с парными сыворотками,
ИФА) – для подтверждения диагноза.
Ускоренный: РИФ, ИФА, ПЦР.

31. Бактериологический метод

1 этап. Посев материала на КУА или ср. Борде-Жангу
для получения колоний.
2 этап. Материал из колоний микроскопи-руют и
пересевают на среду для получения чистой культуры.
3 этап. Микроскопия, РА на стекле с К-сывороткой.
Проба на уреазу.

32. Специфическая профилактика. Лечение

Убитая коклюшная вакцина в составе АКДС
трехкратно с 3-месячного возраста с интервалом 4-6
недель.
Бесклеточная вакцина (очищенные а/г).
Иммуноглобулин
Эритромицин, азитромицин в первые 5 дней после
контакта с заболевшим.
Чувствительны ко многим а/б, кроме пенициллина.

33. Возбудители туберкулеза (от лат. tuberculum – бугорок)

Открыты Р.Кохом в 1882 г.
В 1890 г. Р.Кохом открыт
туберкулин, сыгравший большую роль в диагностике
туберкулеза.
В 1911 г. Р.Кох удостоин
Нобелевской премии за открытие
возбудителя туберкулеза.
В связи с бурным ростом заболеваемости ВОЗ в 1993 г.
объявила туберкулез проблемой «всемирной опасности»

34. Туберкулез

Это первично хроническое заболевание человека и животных,
сопровождающееся поражением различных органов и систем
(органов дыхания, лимфатических узлов, кишечника, костей и
суставов, глаз, кожи, почек и мочевыводящих путей, половых
органов, ЦНС).
По данным МЗ РФ общая заболеваемость в составляет 57,7 на
100 тыс. населения
Заболевают туберкулезом чаще лица в возрасте 18-44 года
При снижении заболеваемости чувствительными формами
туберкулеза наблюдается рост числа больных с МЛУтуберкулезом среди впервые выявленных
Доля больных с МЛУ-туберкулезом среди
бактериовыделителей при туберкулезе органов дыхания
составила 47,3 %.

35. Возбудители туберкулеза

Семейство: Mycobacteriaceae
Род: Mycobacterium (от греч. myces – гриб
и bacteria – палочка)
Виды: M. тuberculesis – человеческий вид
(более 90% случаев)
M. вovis – бычий вид (в 5% случаев)
M. africanum – в основном среди населения
тропической Африки(в 3% случаев)
M. аvium, M. murium

36. Морфологические и тинкториальные свойства

М. tuberculosis - длинные тонкие палочки
M.bovis – короткие толстые палочки или слегка
изогнутые, слабо ветвящиеся.
Неподвижны, спор не образуют, имеют микрокапсулу.
Наружный слой клеточной стенки содержит много
липидов, определяющих спирто-, кислото-,
щелочеустойчивость.
Морфовары: L-формы, ультрамелкие, зернистые,
нитевидные и др.
Ярко-красные по Цилю-Нильсену, грамположительны

37. Микобактерии (окр. по Цилю-Нильсену)

38. Культуральные свойства

Рост на питательных средах медленный (4 недели).
Среды: Левенштейна-Йенсена, Финна, Школьниковой,
Соттона и др.
Рост в жидких средах в виде поверхностной пленки, на
плотных – в виде чешуйчатых серовато-белых колоний.
Метод микрокультур Прайса – на стеклах в жидкой среде
через 48-72 часа у вирулентных штаммов выявляется кордфактор – при микроскопии (после окр. по Цилю-Нильсену)
«косы» или «жгуты».
Корд-фактор – гликолипид (фактор патогенности).

39. Рост туберкулезных микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена

40. Факторы патогенности

Туберкулин, липиды - вызывают развитие гранулем и
некроза.
Корд-фактор (гликолипид) – разрушает митохондрии
клеток мишеней .
Эпидемиология
Во внешней среде сохраняются несколько месяцев
Источник – больные люди, животные.
Пути передачи – воздушно-капельный, воздушнопылевой, алиментарный, контактный.
Входные ворота – чаще дыхательные пути

41. Формы заболевания

1) Первичная туберкулезная
подростков
интоксикация у детей и
2) Туберкулез органов дыхания
3) Туберкулез других органов и систем
Периоды заболевания
1) Инкубационный период от 3-8 недель до 1 года и
более (возбудитель в фагоцитарных клетках л/узлов).
2) Первичный туберкулез
3) Диссеминированный туберкулез
4) Вторичный туберкулез

42. Патогенез

Микобактерии поглощаются макрофагами (незавершенный
фагоцитоз), бактериемия, может развиться первичная
туберкулезная интоксикация у детей и подростков.
При лимфогематогенном распространении высоковирулентных
штаммов – специфическое туберкулезное воспаление,
образование первичного туберкулезного комплекса (первичный
аффект - очаг воспаления, лимфангоит - воспаление л/сосудов,
лимфаденит).
Из первичного комплекса инфекция может диссеминировать
бронхогенно, лимфогенно, гематогенно. В таком случае
развивается диссеминированный легочный и внелегочный
туберкулез.

43.

При обратном развитии происходит образование петрификата
(отложение Са). Вокруг очага формируется капсула из
соединительной ткани – очаг Гона
Возможно образование персистирующей L-формы
микобактерий. При снижении резистентности вызывают
активацию процесса и развитие вторичного туберкулеза
В основе специфической воспалитель-ной реакции лежит
реакция гиперчувст-вительности 4 типа с образованием
гранулем, состоящих из очага казеоз-ного некроза в центре,
содержащего микобактерии, и окруженного эпителиоидными и гигантскими клетками
Иммунитет – нестерильный, появляется через 4-8 недель

44. Схема патогенеза Заражение Туберкулезная гранулема

Творожистый распад
гранулемы
Генерализация процесса
Генерализация процесса

45. Первичный туберкулезный комплекс (рис. 1). Острый очаговый туберкулез легких (рис. 2)

46.

Туберкулез почек
Туберкулезная
гранулема в
сетчатке глаза

47. Диагностика и профилактика

Исследуемый материал: мокрота, испражнения, моча,
плевральная жидкость, ликвор, биопсийный материал и др.
Бактериоскопический
Бактериологический
Серологический (РСК, РПГА, РИФ)
Биологический (заражение морских свинок)
Аллергический (диаскинтест, проба Манту)
ПЦР
Профилактика - БЦЖ вводят новорожденным детям на 3 7 день жизни вакциной, щадящей для первичной вакцинации
(БЦЖ-М). Ревакцинация проводится детям в возрасте 6 - 7
лет вакциной для профилактики туберкулеза (БЦЖ)

48. Бактериоскопический метод (ориентировочный)

Методы обогащения материала – гомогенизация (кислотой
или щелочью) и флотация мокроты (добавление ксилола и
встряхивание в течение 10-15 мин.). Окр. препарата по
Цилю-Нильсену.
Прямая микроскопия – окр. по Цилю-Нильсену.
Люминесцентная микроскопия.

49. Бактериологический метод (основной)

1 этап. Микроскопия. Посев на ср. ЛевештейнаЙенсена, Финна. Инкубация 3 мес.
2 этап. Микроскопия. Биохимические свойства.
Идентификация полученной культуры и определение
чувствительности к химиопрепаратам.
3 этап. Окончательный ответ.
Биологический метод
Очень чувствительный метод – позволяет выявлять в
исследуемом материале от 1 до 5 м.к.
Заражение морской свинки в/бр, вскрытие органов,
мазки из органов, посевы органов.

50. Ускоренная диагностика

Ускоренный метод микрокультур Прайса: получение
микрокультур на предметном стекле, погруженном в
гемолизированную кровь, с последующей окраской по
Цилю-Нильсену и микроскопией через 7 и 14 дней.
Микобактерии растут в виде дорожек (корд-фактор).
ПЦР
Автоматизированные
коммерческие ситемы культивирования:
ВАСТЕС MGIT 960 (индикация флюорохромами) и МВ/ВасТ (колориметрическая
индикация).

51. Аллергический метод

Проба Манту: в/к введение туберкулина. РГЗТ (клеточного типа)
при инфицировании или вакцинации
Туберкулин – аллерген, полученный из туберкулезных
микобактерий
Старый туберкулин Коха (эндотоксин)
Новый туберкулин – очищенный.
Содержит в 0,1 мл 1 дозу.

52. Результаты пробы Манту

Слабоположительная – папула 5-9 мм
Положительная средней интенсивности — папула 10-14 мм
Выраженная папула 15-16 мм, вираж
Учитывают через 48-72 часа. Отрицательный результат – папула
диаметром до 4-5 мм
Гиперэргическая – папула 17 мм и более

53. Диаскинтест

С 2015 года в рамках федерального приказа диаскинтест официально
заменил Манту
Точность Манту составляет 50-70%, диаскинтеста – 90%
Если в туберкулине содержатся убитые микобактерии и туберкулин, а в
диаскинтесте – их поверхностный белок
Манту дает ложноположительные результаты, диаскинтест ложноотрицательные

54. Благодарю за внимание !