Открытие явления трансформации

1. Открытие явления трансформации

1928 г.
открытие явления трансформации
Streptococcus pneumoniae – пневмококки.
Бактерии, вызывающие пневмонию.
1. Капсульный S-штамм – патогенный
2. Бескапсульный R-штамм – непатогенный
Фредерик Гриффит

2.

3.

4.

5.

Tc r
Ap r
а
pBR322
со встроенным
фрагментом ДНК
Ф
Трансформация
1
2
1
2
3
Ампициллин
3
Тетрациклин
Посев на
чашки Петри
Tc r
E. coli
Ампициллин
Ap r
б
pBR322
Tc r
Трансформация
Посев на
чашки Петри
E. coli
Тетрациклин
Схема выявления плазмид, содержащих встройку клонируемых фрагментов ДНК

6.

Скрининг библиотеки
λ-фагов и выделение
индивидуального фага,
содержащего клон ДНК
Мембрана
Отдельные
бляшки
Чашка Петри с газоном
бактерий и бляшками,
образованными фагом l
Получение отпечатков
фаговой ДНК на мембране
Мембрана с
фаговой ДНК
Гибрид
фаговой
ДНК с
радиоактивным
зондом
Фотопленка
Отмывка мембраны,
денатурация ДНК и
гибридизация с радиоактивно
мечеными зондами (красный цвет)
Отмывка от избытка зонда
и детекция гибридизации
с помощью авторадиографии
Пятно засветки указывает на
бляшку, содержащую фаги с
необходимой ДНК

7.

Shuttle vectors:
1.
Capable of replicating in two or more types of hosts.
2.
Replicate autonomously, or integrate into the host genome and replicate
when the host replicates.
3.
Commonly used for transporting genes from one organism to another (i.e.,
transforming animal and plant cells).
Example:
*Insert firefly luciferase gene
into plasmid and transform
Agrobacterium.
*Grow Agrobacterium in large
quantities and infect tobacco
plant.
http://cwx.prenhall.com/bookbind/pubboo
ks/horton3/medialib/media_portfolio/23.ht
ml