Методы анализа белка в биологическом материале

1. Методы анализа белка в биологическом материале

1

2. План лекции

Сыворотка и плазма крови как основные
биообъекты медико-биологических
исследований.
Биохимический анализ крови человека с
помощью полуавтоматических и
автоматических анализаторов «Телефон»
здоровья.
Определение общего белка.
Характеристика важнейших белков
сыворотки крови.
Понятие о функциональных и
нефункциональных ферментах.
Использование ферментов в клинической
диагностике.
14.06.20
22
2

3. Сыворотка и плазма крови как основные объекты медико - биологических исследований.

Сыворотка и плазма крови как
основные объекты медико биологических исследований.
Кровь-биологический паспорт человека.
Как известно, кровь состоит из твердых
элементов: красных (эритроцитов), белых
(лейкоцитов) кровяных клеток и
тромбоцитов, взвешенных в жидкой среде,
называемой плазмой.
Кровь обладает способностью свертываться
(коагулировать).Остающаяся при этом
жидкая фаза называется сывороткой.
Сыворотка-жидкая составляющая крови без
форменных элементов и фибрина. В
медико-биологических исследованиях чаще
используют сыворотку крови.
14.06.20
22
3

4. Биохимический анализ крови

Биохимия и медицина тесно связаны между собой.
В основе многих болезней лежат нарушения
биохимических процессов.
Биохимический анализ сыворотки крови относится к
числу самых доступных и информативных методов
лабораторного исследования.
В настоящее время во всем мире проводят
биохимический анализ крови с помощью
полуавтоматов или автоматических устройств.
Они включают 30-40 наименований показателей,
некоторые из них нужно обязательно
14.06.20 контролировать
4
22
в течение жизни.

5. «БИОХИМИЧЕСКИЙ ФОТОМЕТР СТАТ ФАКС 1904 ПЛЮС» (США)

1.-Держатель кюветы с
контролируемой
температурой
2.- Крышка
3.- Термостат
4 .-Углубление для бумаги
принтера (под крышкой)
5.- Щель для бумаги принтера
6.- Буквенно-цифровой дисплей
7. -Клавиатура
14.06.20
22
5

6. Применение

Прибор является компактной бихроматической
фотометрической системой с шестью
светофильтрами и встроенным инкубатором на 37 С,
управляемой с помощью микропроцессора. Для
прибора используются стандартные кюветы с длиной
оптического пути 12 мм.
14.06.20
22
6

7. Применение

Прибор имеет энергонезависимую
память, что позволяет записывать и
хранить параметры опытов и
стандартные кривые, которые в
дальнейшем могут быть быстро вызваны
из памяти. Прибор содержит
инкубационный блок с температурой 37
С на 12 мест. Такая же
термостабилизация предусмотрена в
держателе кюветы, в котором
осуществляется считывание
поглощения.
14.06.20
22
7

8. Меню тестов.Следующие анализы:

1. Альбумин.
2. Общий белок
3. Билирубин
4. Мочевина
5. Глюкоза окс.
6.Глюкоза гексо.
7. Мочевая кислота
8. Креатинин
9.Железо
10.Хлориды
11.Кальций
12.Фосфор
13. Магний
14.холестерин
15.ЛПВП
16. ЛДГ
17.КФК
18. триглицериды
19.ЩФ
20.АСТ
21.АЛТ
22.КФ
23.натрий
24.калий
25.гемоглобин
26. Липаза
27. Т3
28. Т4
29. КФК МВ
30. ТТГ
14.06.20
22
8

9. Автоматический биохимический анализатор «Сапфир-400»

14.06.20
22
9

10.

Может осуществлять 240 анализов в час.
Способен работать 24 часа в сутки.
Кюветы автоматически моются.Один набор
кювет на год работ.
Бесконтактное пневматическое
перемешивание.
Имеет встроенный ион-селективный
модуль для измерения ионов калия,
натрия,хлора в любых биологических
жидкостях.
Анализатор управляется внешним IВMсовместимым компьютером.Результаты
анализов за последние 6 мес.сохраняются
в базе данных.Результаты анализов можно
распечатать на обычном принтере.
14.06.20
22
1
0

11. Цели проведения биохимического анализа крови

Диагностика. Если из истории
болезни и результатов общего
анализа крови не удается поставить
диагноз, то назначают
биохимический анализ крови.
Мониторинг, который представляет
собой контроль за течением болезни
и результативностью лечения.
Скрининг- выявление болезни на
доклинической стадии. Например,
проводят массовое обследование
всех новорожденных на
фенилкетонурию (ФКУ).
14.06.20
22
1
1

12. Биохимический анализ крови.

Получение информации о возможном
исходе заболевания. Например, риск
возникновения коронарной болезни
сердца повышается при увеличении
концентрации холестерина в плазме
крови.
На биохимические показатели, как
правило, не влияют пол (кроме
половых гормонов), возраст (кроме
щелочной фосфатазы), положение
тела (белки),состояние питания
(глюкоза).
14.06.20
22
1
2

13. «Телефон» здоровья

03-5-140-5-3-0:
0 – здоровые люди не курят;
3 - ходят по 3 км в день или занимаются
умеренной физической активностью по 30
мин в день;
5 – употребляют 5 порций овощей и фруктов в
день;
140 – имеют уровень систолического давления
менее 140 мм рт. Ст.;
5 – общий холестерин крови – менее 5
ммоль/л;
3 – имеют уровень «плохого» холестерина
менее 3 ммоль/л;
0 – не страдают избыточным весом.
14.06.20
22
1
3

14. Определение общего белка. Характеристика важнейших белков сыворотки крови.

N содержания общего белка в сыворотке
крови:6.4-8.3 г/л или 6.4-8.3%.
Снижение количества белкагипопротеинемия может быть:
При недостаточном количестве белка в
рационе (голодание, жесткие диеты);
При высокой потере белка (болезни почек,
новообразования,раны с сильными
кровопотерями);
При нарушении белкового обмена , связанного
с ослаблением его синтеза (болезни печени).
1
14.06.20
22
4

15.

Гиперпротеинемия развивается в
следующих случаях
-
Дегидратация при травмах и ожогах;
-
При неукротимой рвоте, диабете;
-
При множественных миеломах
(раковых заболеваниях)
14.06.20
22
1
5

16. Характеристика важнейших белков сыворотки крови

1.Альбумин – важнейший белок сыворотки крови,
составляющий примерно половину всех
сывороточных белков.N содержания в сыворотке
крови-3.5- 5.0 г/л. Уменьшение содержания
альбумина может быть проявлением некоторых
болезней почек, печени, кишечника. Повышение
альбумина обычно связывают с обезвоживанием.
14.06.20
22
1
6

17.

2. СРБ (С- реактивный белок).N
содержание в сыворотке крови-0- 5
мг/л.
Является самым чувствительным и
самым быстрым индикатором
острого воспалительного
заболевания (воспаления легких,
аппендицита и др.) в биохимическом
анализе крови, а также его измеряют
при активном атеросклеротическом
процессе (повышается). Тогда нужно
принимать статины, которые
уменьшают риск разрыва бляшек.
14.06.20
22
1
7

18.

3.Гемоглобин. N cодержание
гемоглобина в крови составляет у
мужчин 130-180 г/моль; у женщин – 120160 г/моль. Повышение уровня
гемоглобина в крови происходит при
чрезмерной физической нагрузке или
возбуждении; пребывании на большой
высоте, а также при дегидратации,
ожогах, упорной рвоте,кишечной
непроходимости.
Снижение гемоглобина происходит при
анемии, положении лежа. Гемоглобина
много в печени, мясе, а не в гранате.
14.06.20
22
1
8

19.

4. Тропонин.N – 0-0.4 мкг/л.Это один из
компонентов сократительного аппарата клеток
сердца. При инфаркте мембрана клетки
разрушается и он выходит в кровь.
Обнаруживается после 6 часов инфаркта до 2-х
недель. В настоящее время считают, что анализы,
говорящиеоб инфаркте миокарда- это тропонин, С
–реактивный белок и фермент
креатинфосфокиназа MB (сердечная).
N- 0-5.8 нг/мл. Появляется в сыворотке крови на 2
часа раньше, чем тропонин.
5. Инсулин. N натощак- 3-15 ме/л.
14.06.20
22
1
9

20. Понятие о функциональных и нефункциональных ферментах

Некоторые ферменты, проферменты и
их субстраты в норме постоянно
циркулируют в крови человека и
выполняют определенные
физиологические функции. Их
называют функциональными
ферментами.
Примерами функциональных ферментов
являются проферменты компонентов
систем свертывания крови и
растворения кровяного сгустка.
14.06.20
22
2
0

21.

Нефункциональные ферменты плазмы
не выполняют в крови никаких
известных физиологических функций.
Их субстраты в плазме обычно не
обнаруживаются и в норме их
концентрация в крови человека почти в
миллион раз меньше, чем в тканях.
Появление этих белков в плазме крови в
повышенных концентрациях указывает
на повышенную скорость деструкции
тканей.
Таким образом, измерение в крови
уровня нефункциональных ферментов
дает врачу ценную диагностическую и
прогностическую информацию.
14.06.20
22
2
1

22.

Нефункциональные ферменты плазмы
включают белковые секреты
экзокринных желез и истинно
внутриклеточные белки.
Например, ферментами, выделяемыми
экзокринными железами являются
панкреатическая амилаза, липаза,
щелочная фосфатаза (из желчи) и КФ из
простаты.
Они поступают в плазму путем простой
диффузии .
Истинно внутриклеточные белки в норме в
систему кровообращения не поступают.
14.06.20
22
2
2

23.

Перечень нефункциональных ферментов,
используемых в медицине для диагностики
заболеваний.
Фермент
Аминотрансферазы
миокарда,
Заболевание
инфаркт (1.АСТ и 2.АЛТ)
вирусный
гепатит
14.06.20
22
2
3

24.

3. I – амилаза
4.КФК(креатин
фосфокиназа)
КФК МВ
5.ЛДГ(изозимы)
6.Липаза
7.КФ (рН 4.9)
8.ЩФ(рН 10)
9. –ГТФ( -глутамилтрансфераза).
острый панкреатит
заболевания мышц
инфаркт миокарда
лдг-1,лдг-2 увеличиваются при бронхолегочных заболеван.
острый панкреатит
карцинома предс. железы
разл. забол.костей,закупорка протоков печени
разл. заболевания печени
14.06.20
22
2
4

25. Стандартные клинико-лабораторные показатели

Стандартные клиниколабораторные показатели
1-2.Аминотрансферазы:
1.АСТ N в завис. от метода 6-25мЕ/л.
2.АЛТ N в завис. от метода 3-26мЕ/л.
Они содержатся в высоких концентрациях в мышцах,
печени, мозге.Повышение концентрации этих
ферментов в крови свидетельствует о некрозе или
поражении прежде всего этих тканей.
14.06.20
22
2
5

26.

Повышение показателя имеет место
при инфаркте миокарда (особенно АСТ),
при остром инфекционном гепатите
(АЛТ обычно повышена больше, чем
АСТ), циррозе печени (АСТ повышена
больше,чем АЛТ), при метастазах в
печени или первичной опухоли
печени.АСТ повышается при мышечной
дистрофии.
14.06.20
22
2
6

27.

Снижение показателя имеет место
при недостаточности витамина В6,
часто после повторных процедур
гемодиализа, при почечной
недостаточности, при беременности.
3.а).Амилаза сыворотки. N =0.8-2
мЕ/л.
Повышение показателя имеет место
при остром панкреатите, кисте
поджелудочной железы, при
закупорке протока поджелудочной
железы, при эпидемическом
паротите.
14.06.20
22
2
7

28.

Снижение показателя имеет место
при остром и хроническом гепатите,
недостаточности поджелудочной
железы, иногда при токсикозе
беременности.
б). Амилаза мочи. Повышение
амилазы
в моче происходит параллельно
повышению ее в крови.После того,
как показатель амилазы в крови
после приступа панкреатита
вернется к норме, в моче он будет
оставаться повышенным до 7
дней.Поэтому определение
активности амилазы в моче может
быть полезно провести уже после
приступа.
14.06.20
22
2
8

29.

4. Креатинфосфокиназа (КФК)
сыворотки.
N=10-50 мЕ/л при 30С.
КФК ускоряет расщепление
креатинфосфата с участием АДФ.При
этом получается креатин и АТФ.
КФК много в скелетной и сердечной
мышцах, в мозге.
14.06.20
22
2
9

30.

Повышение показателя имеет место
при мышечных повреждениях (инфаркт
миокарда, травма мышцы), при
мышечной дистрофии, инсульте.После
инфаркта миокарда КФК появляется в
крови быстро (за 3-5 часов) и
сохраняется повышенной 2-3
дня.Показатель не повышается при
инфаркте легкого или поражении
паренхимы печени.
14.06.20
22
3
0

31.

КФК представлена 3 изоферментами в
сыворотке крови:ММ- характерен для
скелетной мышцы, МВ- характерен для
миокарда и ВВ-характерен для мозга.
Содержание КФК повышается в
сыворотке крови при повреждении
скелетных мышц, мышцы сердца.
Уровень КФК-ВВ повышается при
тяжелом шоке, при некоторых
карциномах.
14.06.20
22
3
1

32.

5. ЛДГ в сыворотке.N=55-140 мЕ/л при
30 С.
Повышение показателя –при некрозах
тканей, особенно при остром
повреждении сердца, повреждениях
эритроцитов, почек, скелетных мышц,
печени, легких и кожи. Имеет 5
изоферментов.
6.Липаза сыворотки. N=0.2-0.5
ед.Содержание этого фермента,
расщепляющего жиры, в
циркулирующей крови мало.
14.06.20
22
3
2

33.

При панкреатитах липаза поджелудочной
железы попадает в кровь, где ее высокая
концентрация сохраняется дольше, чем
повышенная концентрация амилазы.
7.Кислая фосфатаза сыворотки.N=0.1-0.63
ед.Сигма.
Присутствует в высокой концентрациях в
предстательной железе, эритроцитах и
тромбоцитах.Имеет
изоферменты.Концентрация КФ повышается
в сыворотке крове при карциноме
простаты, при злокачественном поражении
костей, болезнях почек.
14.06.20
22
3
3

34.

8. Щелочная фосфатаза сыворотки
крови. N=30-90 ме/л.
ЩФ присутствует в растущих костях,
в желчи и плаценте.
Повышенная концентрация у детей
(N рост костей); при костных
заболеваниях; при закупорке
желчных протоков; при
заболеваниях печени, вызванных
лекарствами; при беременности.
Снижение концентрации – при
гипотериозе, замедленном росте
костей у детей.
14.06.20
22
3
4

35.

Гамма-глутамилтрансфераза.(ГГТ). N=
0-42 ме/л. Появление этого фермента в
сыворотке крови указывает на наличие
холестаза.Определение концентрации
этого фермента особенно важно при
малосимптомных гепатитах, а также при
хроническом заболевании печени.
Пониженное содержание ГГТ-при
декомпенсированном циррозе печени.
14.06.20
22
3
5