Микробиологическая диагностика дизентерии

1.

Микробиологическая
диагностика
дизентерии

2.

Дизентери́я — инфекционное
заболевание,
характеризующееся синдромом
общей
инфекционной интоксикации и
синдромом
поражения желудочнокишечного тракта,
преимущественно дистального
отдела толстой кишки. Частным
случаем дизентерии
является шигеллёз.

3.

Дизентерию вызывают бактерии
рода Shigella. Шигеллы хорошо растут в
обычных питательных средах; при
разрушении микробных клеток
выделяется эндотоксин, который вызывает
симптомы интоксикации. Кроме того,
шигеллы продуцируют несколько
видов экзотоксина: цитотоксин,
повреждающий мембраны эпителиальных
клеток; энтеротоксины, усиливающие
секрецию жидкости и солей в просвет
кишки; нейротоксин, обнаруживаемый в
основном у бактерий Григорьева-Шиги (Sh.
dysenteriae серовара 1).
В современных условиях наибольшее
распространение имеют шигеллы
Флексенера и Зонне.

4.

Ежегодно происходит до 90 миллионов
случаев заболевания шигеллёзами, по
крайней мере 700 000 из них со
смертельным исходом.
Единственным источником инфекции
является больной человек.
Заражаются в основном контактнобытовым, водным и алиментарным (через
рот) путём.
Наибольшей выраженности проявления
болезни достигают на 2—3-й сутки болезни.
Отмечаются острые позывы на дефекацию.
Кожа становится бледной, язык покрывается
густым бурым налетом. Со стороны
сердечно-сосудистой системы отмечаются
учащенное сердцебиение, снижение КД.
Самыми характерными признаками
являются спазм и болезненность при
прощупывании левой подвздошной
области.

5.

Шигеллы факультативные
анаэробы.
Неприхотливы к
питательным средам.
Размножаются на МПА
и МПБ при температуре
37° С и рН 7,2-7,4.
Элективными и
дифференциальнодиагностическими
средами для них
являются среды
Плоскирева, Эндо,
ЭМС. Растут в виде
небольших,
полупрозрачных,
сероватых, круглых
колоний, размером 152 мм в S-форме.
Схема
бактериологического
исследования при
дизентерии.
Исключением
являются шигеллы
Зонне, которые
часто
диссоциируют,
образуя крупные,
плоские, мутные, с
изрезанными
краями колонии Rформы. В жидких
питательных средах
шигеллы дают
равномерную муть,
R-формы образуют
осадок.

6.

Ферментативные свойства шигелл
(к - расщепление с образованием кислоты)
Ферментативные свойства шигелл менее выражены, чем у других представителей
Enterobacteriaceae: они расщепляют углеводы без газообразования, не расщепляют
лактозу и сахарозу. Исключением являются шигеллы Зонне, которые на 2-3-й сутки
расщепляют эти углеводы.

7.

8.

Лабораторная диагностика
Клинический материал: испражнения,
ректальный мазок.
Методы:
1. Бактериологический (культуральный
метод) –основной;
2. Экспресс-методы – обнаружение
антигенов шигелл: латексагглютинация,
иммунофлуоресцентный прямой,
РОНГА; ИФА для обнаружения токсинов;
3. Молекулярно-генетический: ПЦР;
4. Серологический методы для
выявления антител применяются
ограниченно с целью ретроспективной
диагностики.
Мазок из чистой культуры S. flexneri. РИФ.
Мазок из чистой культуры S. flexneri.
Окраска по Граму

9.

Бактериологический метод
Проводят в кратчайшие сроки – «у постели больного»
Получение проб биоматериала (испражнения,
ректальный мазок)

10.

Предварительный этап
Среда
предназначена для
накопления и
выделения бактерий
рода Salmonella и
Shigella
Селенитовый бульон

11.

1этап. Рассев по
поверхности плотных
питательных сред с
целью получения
изолированных
колоний.
2 этап (А). Макро- и
микроскопическое
изучение колоний.
Бесцветные лактозонегативные колонии на среде Эндо.

12.

2 этап (Б). Отбор
колоний Шигелл
по результатам
реакции
агглютинации на
стекле.
Реакция агглютинации
бактерий из трех
лактозонегативных колоний
с поливалентной
дизентерийной сывороткой.

13.

Пересев лактозоотрицательных колоний на среду Расселя или другие
дифференциально-диагностические среды для накопления чистой
культуры
4 — 6 — скошенный столбик из сухой
питательной среды (рис. 4 —
расщепление мочевины, рис. 5 —
расщепление лактозы, рис. 6 —
расщепление глюкозы); рис. 7 — 9 —
среда Расселла с индикатором
Андраде (рис. 7 — расщепление
глюкозы без образования газа, рис. 8 —
расщепление глюкозы с
образованием газа, рис. 9 —
расщепление лактозы).

14.

3 этап. Идентификация чистой культуры.

15.

Биохимическая
идентификация.
Чистая
культура на
среде
Клиглера:
глюкоза+
лактозаСреда Клиглера

16.

Серотипирование
Учет реакции агглютинации
чистой культуры с
монорецепторными
адсорбированными
шигеллезными сыворотками,
содержащими антитела к:
A. S.sonnei
В. S.flexneri серотип 1-5
С. S.flexneri серотип 6
D. Shigella dysenteriae серотип 1
E. Shigella dysenteriae серотип 2
G. Shigella dysenteriae серотип 3-7

17.

Название реакции - развернутая реакция агглютинации
Исследуемый материал - сыворотка крови (антитела)
Диагностический препарат - диагностикум из убитых шигелл
Разведения сыворотки больного
Диагностикумы
1/100
1/200
1/400
1/800
1/1600
1/3200
КД
КС
Хлопья+
Хлопья+
Хлопья+
Хлопья+
Хлопья+
Осадок- осадок
прозрачная
Осадок- Осадок- Осадок- Осадок- Осадок- Осадок- осадок
прозрачная
Осадок- Осадок- Осадок- Осадок- Осадок- Осадок- осадок
прозрачная
S.sonnei
S.flexneri
S.flexneri var
newcastle

18.

Определение чувствительности к
антибиотикам
Чувствительность штаммов Shigella sonnei к
антибактериальным препаратам
Умереннорезистентные
(%)
Антибиотик
Чувствительные
(%)
Резистентные
(%)
Ампициллин
92,7
2,4
4,9
Ампициллин/сульбактам
92,7
4,9
2,4
Амоксициллин/клавуланат
95,1
4,9
0
Цефотаксим
97,6
2,4
0
Цефтриаксон
100
0
0
Тетрациклин
33,3
2,6
64,1
Ципрофлоксацин
95,1
4,9
0
Норфлоксацин
100
0
0
Ко-тримоксазол
2,4
0
97,6

19.

Спасибо за внимание!