Патогенные кокки

1.

Запорожский государственный
медицинский университет
Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии
ПАТОГЕННЫЕ
КОККИ
ас. Войтович А. В.

2. Форма бактерий

– круглые (кокки)
• идеальный шар
– стафилококки
• овальные –
стрептококки
• ланцетовидные
– пневмококк
• бобовидные –
нейссерии

3.

4.

Строение клеточной стенки
бактерий

5.

Стафилококки (Staphylococcus)
Стафилококки впервые открыл Л. Пастер в 1880
году.
1822 - 1895

6.

Стафилококки
Таксономическое положение
• род Staphylococcus
>35 видов
Коагулазопозитивные стафилококки:
S.aureus, S. intermedius, S.hyicus
Коагулазонегативные стафилококки:
S.epidermidis, S.saprophyticus, S. hominis,
S.capitis

7. Микробиологическая диагностика

1. Бактериоскопический
2. Бактериологический (культуральный) метод основной;
3. Серологические методы (диагностика при
хронических или латентных формах инфекции)

8. Этапы выделения и изучения

Материал: смыв со слизистой, гной, кровь,
мокрота, отделяемое раны и др.
1 этап:
микроскопия полученного материала
(первичный препарат)

9. Этапы выделения и изучения

10. Этапы выделения и изучения

2 этап:
Выделение чистой культуры
(посев на КА и ЖСА)

11. Выделение чистой культуры по Голду

12. Этапы выделения и изучения

3 этап:
Изучение культуральных и морфологических
свойств; отсев типичных колоний
стафилококка на свежий агар

13.

14.

15.

16.

17. Этапы выделения и изучения

4 этап:
Идентификация выделенной чистой культуры.
Биохимическая идентификация на системах
Аpi 20 STAPH

18. Идентификация стафилококков

19. Б. Определение плазмокоагулазы

При выделении плазмокоагулазы стафилококками в
пробирке образуется сгусток кроличьей плазмы.

20. Определение каталазы

При добавлении перекиси водорода
видно выделение кислорода
Фаготипирование
стафилококков
Видно зону лизиса культуры
стафилококков диагностическими
типовыми бактериофагами.

21. Стафилококки

Определение чувствительности к антибиотикам
методом бумажных дисков.
Вокруг дисков с антибиотиками видны зоны задержки
роста бактериальной культуры.

22.

23. Токсины

По степени связи с бактерией
• Класс А – секретируемые во внешнюю среду;
• Класс В – токсины, частично связанные с микробной клеткой и
частично секретируемые в окружающую среду;
• Класс С – токсины, прочно связанные с бактерией.
По механизму действия
• токсины, повреждающие клеточные мембраны;
• токсины, ингибирующие синтез белка;
• токсины, активирующие пути метаболизма,
контролируемые вторичными мессенджерами;
• протеазы;
• активаторы иммунного ответа.

24. Стафилококки: факторы патогенности

• Ферменты вирулентности (патогенности):
Плазмокоагулаза : переводит протромбин в тромбин из фибриногена вокруг
микробной клетки образуется фибриновый чехол защита от фагоцитоза.
Гиалуронидаза, коллагеназа, ММР
разрушение межклеточного вещества соединительной ткани
Фибринолизин (Staphylokinase)
растворение сгустка фибрина в зоне воспаления распространение
микробов вглубь органов и тканей
ДНК-аза
Лецитиназа и др.
Белок А (поверхностный белок, ковалентно связан с ПГ):
– взаимодействует с Fc-фрагментами IgG, в результате чего нарушается активация
системы комплемента и нарушается опсонизация и фагоцитоз
– митоген для Т- и В-лимфоцитов;

25. Стафилококки: факторы патогенности

Экзотоксины
– Мембраноповреждающие ( -токсин, β-,γ-,δ-, лейкоцидин ПатонаВалентайна-PVL).
– Активаторы иммунного ответа (эксфолиатины, экзотоксин
синдрома токсического шока, энтеротоксины).
Аллергены – вызывают как ГНТ, так и ГЗТ.
Перекрестно реагирующие антигены
Факторы, угнетающие фагоцитоз (микрокапсула, белок А,
экзотоксины)

26. Neutrophil extracellular traps (NETs)

Panton-Valentine Leukocidin

27. NETs

28.

29.

30. Метициллинрезистентные Staphylococcus aureus (МРСА)

• Главная проблема лечения стафилококковых
инфекций – высокая лекарственная устойчивость.
• Один из механизмов лекарственной устойчивости –
продукция
β-лактамазы
• Известны пенициллиназа-резистентные антибиотики,
такие как оксациллин, метициллин и др.
• Устойчивость к метициллину (оксациллину) является
маркером на множественную лекарственную
устойчивость.
• МРСА составляют основную проблему
внутрибольничных инфекций
• В отношении МРСА эффективны: гликопептидный
антибиотик – ванкомицин, оксазолидоновый
антибиотик – линезолид.

31.

Основные представители микробиоты слизистой
оболочки носа студентов 2-го курса 2012 – 2014 гг
Частота выявляемости
S. aureus (КПС)
составила почти 30%

32. Фенотипы АБ-резистентности стафилококов к бета-лактамам

КПС
КНС
30%
до групи MLS

33. Принципы лечения стафилококковых инфекций

1. Антибиотики;
2. Стафилококковый бактериофаг (при локализованных
формах), пиобактериофаг;
3. Стафилококковый анатоксин (при лечении хронических
форм инфекции);
4. Гипериммунная стафилококковая плазма, сыворотка
(лечение токсинемии);
5. Стафилококковая аутовакцина (лечение хронических
форм инфекции).

34.

Бактерии для подсчета сородичей используют
химическую систему связи – так называемый Quorum
sensing. Свой кворум бактерии определяют химическим
путем, выделяя особые сигнальные вещества –
феромоны. Их концентрацию они измеряют с помощью
специфических рецепторов.

35. Quorum sensing

• При малой плотности колонии (слева) токсины
(красные кружки) не продуцируютя, при
достижении кворума (справа) – синтез. Синие
кружки - феромоны

36. Как обмануть бактерии?

37. СТРЕПТОКОККИ

Стрептококки (Streptococcus) Впервые
стрептококки открыл Т. Бильрот в 1874 г.
при ранових инфекциях, позже Л. Пастер
выявил их при сепсисе.

38. СТРЕПТОКОККИ

Таксономическое положение
• Семейство Streptococcaceae
• род Streptococcus
Стрептококки классифицируют
по:
характеру роста на кровяном
агаре
антигенному строению
(классификация по Лансфилд):
серогруппа – полисахаридный
антиген клеточной стенки
серотип – по М-белку
• α – неполный или
«зеленящий» гемолиз;
• β – полный гемолиз;
• γ – отсутствие гемолиза.

39.

40.

41. Совмещенная классификация стрептококков способность к гемолизу + группу по Лансфилд

Бета-гемолитические Streptococcus (группа по
Лансфилд)
– Группа A Streptococcus (S. pyogenes)
– Группа B Streptococcus (S. agalactiae)
– Группа C Streptococcus
– Группа G Streptococcus
Альфа-гемолитические Streptococcus
– S. pneumoniae (Pneumococcus)
– S. viridans (бактериальный эндокардит)
Негемолитические Streptococcus
– S. faecalis (Группа D)
– Отдельные варианты групп B, C, D, H, and O

42. Стрептококки: свойства

• Морфологические
овальные грамположительные кокки, располагающиеся в мазке
цепочками, спор и макрокапсул не образуют, неподвижны
• Культуральные
растут на сложных средах (содержащих глюкозу, сыворотку или
кровь) при 370С, образуют через сутки мелкие S-формы
колоний
• Биохимические
= стафилококки, но менее выражена протеолитическая
активность
• Серологические
1. полисахаридные (групповые) антигены – полисахарид КС
2. белковые типоспецифические антигены (чаще всего для
серологической идентификации используется М-белок, по нему
различают около 100 сероваров)
Резистентность во внешней среде – высокая

43. Факторы патогенности Streptococcus pyogenes

• Факторы адгези и и колонизации: гиалуроновая капсула (защитная
функция, антигенная мимикрия), поверхностные белки M,R,T (М белок
играет основную роль в фиксации), липотейхоевые и тейхоевые
кислоты, нейраминидаза;
• Факторы инвазии : стрептокиназа(фибринолизин), стрептодорназа
(ДНКаза), гиалуронидаза, фактор помутнения (вызывает гидролиз
липопротеидов, в том числе сыворотки крови
• Антифагоцитарные факторы: капсула, поверхностные белки,
пептидогликан, С-полисахарид, Fc-реактивный белок, С5а пептидаза,
фактор, угнетающий хемотаксис;
• Токсины:
• Стрептолизин О (цитотоксин, действует в анаэробных условиях,
обладает антигенными свойствами);
• Стрептолизин S (цитотоксин, устойчив к кислороду, неиммуногенен);
• Кардиогепатический токсин;
• Эритрогенный токсин (скарлатинозный), серотипы А, В, С

44.

Микробиологическое исследование
стрептококковых инфекций

45.

46.

47. СТРЕПТОКОККИ

Профилактика и лечение
Высокочувствительны к пеницилину и
эритромицину.
Некоторые виды резистентные к тетрациклинам.

48. Нейссерии

Грамнегативные кокки входят в семейство нейсерий
(Neisseriaceae).
А. Нейссер первым открыл в 1879 г. один из видов этой
группы - возбудителя гонореи.

49. Нейссерии: свойства

морфологические:
бобовидные грамотрицательные кокки, располагающиеся в
мазке попарно, спор и макрокапсул не образуют, неподвижны,
L-формы.
культуральные:
растут на сложных питательных средах при 370С (лучше – при
повышенном СО2). Сывороточный агар, Шоколадный агар.
биохимические:
оксидаза (родовой признак), ферментируют до кислоты
глюкозу (видовой признак)
серологические:
антигенами являются белки наружной мембраны (12
серогрупп) и ЛПС
факторы патогенности:
– пили (обеспечивают адгезию и колонизацию)
– ЛПС (эндотоксин)
– IgA протеаза
– Поверхностные антигены (у гонококков)
резистентность во внешней среде
очень низкая

50. Neisseria

• Биохимически малоактивны
• Растут на обогащенных
питательных средах: кровяной
агар, шоколадный агар в
атмосфере 5-10% углекислого
газа
• Мало устойчивы к внешним
воздействиям. Прямые
солнечные лучи, температура
ниже 22°, высыхание, действие
дезинфицирующих средств
приводят к его быстрой гибели.
N. Meningitidis рост на шоколадном
агаре

51. Факторы патогенности

• Адгезивность –фимбрии и белки наружной
мембраны
• Антифагоцитарные факторы –
полисахаридная капсула
• Ферменты инвазии: гиалуронидаза,
протеазы (инактивируют sIgA – фактор местного
иммунитета), нейраминидаза, фибринолизин
• Основной токсин – эндотоксин – ЛПС
наружноймембраны клеточной
стенки(пирогенный, провоспалительный, более
высокотоксичен, чем ЛПС энтеробактерий)

52. Менингококковая инфекция

• Эпидемиология
– источник инфекции: человек
• в 70-80% случаев – носители
• в 10-30% случаев – больные менингококковым
назофарингитом
• в 1-3% случаев – больные генерализованными
формами менингококковой инфекции
– механизм передачи – аэрогенный (воздушнокапельный путь)
Клинические проявления
•бактерионосительство
•менингококковый назофарингит
•менингококкцемия
•эпидемический цереброспинальный менингит

53. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Материал для исследования
• Клинический материал
- ликвор, кровь, слизь
из носоглотки. При
спинномозговой
пункции ликвор
вытекает струей и
обычно мутный.
Пробы хранят не более
2-3 час до
исследования
Взятие мазка (nasopharynx)

54. Экспресс - методы

• Иммунофлуоресцентный
прямой
• Бактериоскопический
(микроскопия мазка из мутного
ликвора, вытекающего под
давлением по Граму)

55. Бактериологический метод

1-этап – посев исследуемого материала на плотные
питательные среды для получения изолированных
колоний - шоколадный агар, сывороточные среды, асцит
агар. Инкубируют при 37°С, 24-48 час., в атмосфере
содержащей 10% углекислого газа.
2-этап - изучение выросших колоний (макроскопическое и
микроскопическое)
и
пересев
на
скошенный
сывороточный агар для получения чистой культуры
• После суточной инкубации образуются голубоватые
колонии с ровными краями и гладкой поверхностью
3-этап - идентификация возбудителя
Биохимическое типирование
Менингококки ферментируют только мальтозу, глюкозу
Тест на чувствительность к антибиотикам

56. Лечение

• Антибиотикотерапия
Специфическая профилактика
• Инактивированная химическая менингококковая вакцина
– содержит капсульные полисахариды
• В настоящее время выпускаются моно (A), ди (A+C) и
поливалентные менингококковые вакцины, обладающие
высокой протективной активностью и малой
реактогенностью.

57. Гонокковая инфекция

• Эпидемиология
– источник инфекции: человек
– механизм передачи – контактный (половой, реже – бытовой)
• Клинические проявления
– Острая гонорея – гнойный уретрит, цервицит;
– Хроническая гонорея – хронический воспалительный процесс во
внутренних половых органах
– Бленнорея – гнойный конъюнктивит, угрожающий слепотой
• Иммунитет
– гуморальный, постинфекционный – практически отсутствует
• Профилактика
– неспецифическая –
• гонобленнореи – 1-2 капли нитрата серебра или другого антисептика сразу
после родов в глаза новорожденному (девочкам – еще и в половую щель)
• острой гонореи – презерватив
– специфическая – не разработана
• Этиотропная терапия
– сульфаниламиды и антибиотики (если выделена культура, то по
результатам антибиотикограммы)
– гоновакцина

58. Незавершенный фагоцитоз (окраска метиленовым синим)

59. Микробиологическая диагностика гонореи

Бактериоскопический метод –
Основной
Бактериологический метод
(Сывороточный агар, асцитический агар с
10% СО2)
Серологический метод (РСК, БордеЖангу)